La recherche de nouveaux traitements contre les maladies infectieuses est un sujet de pleine actualité : l’émergence et la dissémination des mécanismes de résistance aux antibactériens, l’importance croissante des infections associées aux soins, combinées à la quasi absence de nouveaux antibiotiques génèrent, au-delà de la santé individuelle, un véritable problème de santé publique. Il y a urgence à trouver et à proposer des nouvelles approches thérapeutiques pour le traitement de ces infections. Dans ce contexte, les Huiles Essentielles (HE) connues et utilisées depuis des siècles pour leurs propriétés anti-infectieuses, peuvent se révéler être une alternative au « tout antibiotique ». En effet, depuis plusieurs années, les HE connaissent un très net regain d’intérêt, et plusieurs études tendent à démontrer leurs réelles propriétés antimicrobiennes. Cependant, avant d’envisager toute utilisation des HE en thérapeutique anti-infectieuse, nous devons relever un défi de taille : à l’heure actuelle, aucun protocole expérimental, permettant d’évaluer in vitro les propriétés antibactériennes d’une HE, n’est validé ou recommandé par aucune autorité règlementaire, quelle qu’elle soit (Pharmacopée, ISO, ANSM…). L’objectif de cette revue est de présenter les différentes techniques utilisées ou utilisables pour l’évaluation in vitro des propriétés antibactériennes d’une HE, en soulignant les avantages et les inconvénients de chacune.