Interlaboratory testing of methods for assay of xylanase activity, Journal of Biotechnology, vol.23, issue.3, pp.257-70, 1992. ,
DOI : 10.1016/0168-1656(92)90074-J
Conception de Biosolvants À Partir de La Molécule Plateforme Furfural, En Laboratoires Virtuel et Réel, École Doctorale Sciences de la Matière, 2013. ,
Synthèse d'alcool furfurylique par voie blanche Remazol Brilliant Blue-Xylan: A Soluble Chromogenic Substrate for Xylanases Biomass Part A: Cellulose and Hemicellulose, Enstib (Epinal) Enzymology, vol.160, pp.536-577, 1988. ,
Biotransformation of furfural and 5-hydroxymethyl furfural by enteric bacteria, Journal of Industrial Microbiology, vol.42, issue.3, pp.147-150, 1993. ,
DOI : 10.1007/BF01583715
Valorisation Des Xylanes Du Bois : Vers La Synthèse de Copolymères Amphiphiles Bio-Sourcés, 2014. ,
Conversion of furfural into furfuryl alcohol by saccharomyces cervisiae 354, Acta Biotechnologica, vol.10, issue.4, pp.351-354, 1992. ,
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Déshydratation Catalytique Du Xylose En Furfural, 2014. ,
Reduction of Furfural to Furfuryl Alcohol by Ethanologenic Strains of Bacteria and Its Effect on Ethanol Production from Xylose, Biotechnology for Fuels and Chemicals, pp.327-340, 2002. ,
Production of endo-1,4-?-glucanase and xylanase by Trichoderma reesei immobilized on polyurethane foam, Biotechnology Techniques, vol.15, issue.6, pp.401-407, 1994. ,
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Production of fungal xylanases, Bioresource Technology, vol.58, issue.2, pp.137-61, 1996. ,
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Regulation of ??-xylosidase formation by xylose in Trichoderma reesei, Applied Microbiology and Biotechnology, vol.42, issue.5, pp.713-730, 2016. ,
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Enhanced Biotransformation of Furfural and Hydroxymethylfurfural by Newly Developed Ethanologenic Yeast Strains, Twenty-Sixth Symposium on Biotechnology for Fuels and Chemicals, pp.451-460, 2005. ,
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Improvement of thermostability and activity of Trichoderma reesei endo-xylanase Xyn III on insoluble substrates, Applied Microbiology and Biotechnology, vol.72, issue.18, pp.8043-51, 2016. ,
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Characteristics of Trichoderma Reesei?- Xylosidase and Its Use in the Hydrolysis of Solubilized Xylans, Applied Microbiology and Biotechnology, vol.28, pp.4-5, 1988. ,
Transformation Chimique Du Furfural En Acide 2, 5-Furane Dicarboxylique Par Catalyse Hétérogène, 2014. ,
Microbial Degradation of Lignocellulosic Biomass PROTOCOLES Protocole nº1 : Repiquer un champignon sur cultures solides Travailler en milieu stérile, c'est-à-dire dans l'environnement d'un bec benzène, 2013. ,
, Couler dans des boites de pétri un milieu malt/agar à 20%, et laisser refroidir jusqu'à ce que le milieu soit solide. Tremper le scalpel dans de l'alcool et passez le à la flamme jusqu'à évaporation complète de l'alcool
, Ouvrez une boite de pétri du champignon voulu et découpez un carré de 1cm²
, Reposez ce carré dans une nouvelle boite de pétri sur le milieu malt/agar
, Protocole nº2 : mesure de l'activité xylosidase Test du substrat pour effectuer les mesures d'activité
, Préparer une solution de PNP-xylopyranoside à 5mM et diluer la ensuite pour avoir une solution à 2.5mM.Le mélange se
, Prendre une plaque de spectrophotométrie et ajouter dans un puits 150µL de la solution de PNP à 2.5mM. Prélever 2µL de ?-xylosidase et les ajouter dans le puits
, Mettre à chauffer la plaque à 35°C
, Au bout de 20min, stopper la réaction avec de la soude à 0
, Mesurer ensuite l'absorbance au spectrophotomètre à 405nm
, Mesure de l'activité ß-xylosidase dans le milieu de culture
, Prélever dans un eppendorf en milieu stérile 1ml du milieu de culture liquide
, Pour cela rincer à l'éthanol une pipette en verre de 25ml et passez l'extérieur à la flamme
, Mettre ensuite dans un des puits de la plaque du spéctrophotomètre 75µL de la solution substrat validée au préalable de PNP-glucopyranoside à 2, p.5
, Faire chauffer la plaque à 35ºC pendant 20min. Stopper la réaction avec 150µl de soude à 0,1mM
, Protocole nº3 : Mesure de l'activité xylanase
, Remazol Brillant Blue-xylan) avec 5, Préparer une solution de RBB
, Effectuer le mélange réactionnel avec 25 µL d'enzyme
, Ajouter 1ml d'éthanol à 96% et vortexer. Centrifuger ensuite à, 2000.
, Prélever 300 µL du surnageant
Réalisation de charbon de bois Préchauffer le four à une température de 400°C et enclancher l'atmosphère inerte Prélever une quantité de sciure de bois d'environ 5g ,
,
, Eteindre le four et le flux de gaz inerte
, Protocole n°6 : Déshydratation du xylose en réacteur fermé Prélever 180mL d'acide acétique
, Peser, vol.1
, Laisser la durée souhaitée à 150°C, agitation 200 tours/min
, Réalisation d'un milieu solide YP Peser : 20g de Bacto-peptone 10g d'extrait de levure Mélanger l'ensemble dans une bouteille et compléter avec 1L d'eau distillée. Stériliser à l'autoclave. Peser : 20g d'agar, Protocole, vol.7
, A la sortie de l'autoclave, mélanger en conditions stériles pour obtenir un mélange à
, ème de solution Bacto-peptone/Extrait de levure en ajoutant 200mL de ce mélange à la solution de glucose
, Protocole n°8 : Réalisation d'un milieu liquide YPD
,
, Peser 50g d'extrait de levure et 100g de bacto-peptone
, Une fois stérilisés, ajouter en milieu stérile 200 mL du milieu extrait de levure
Réalisation d'une culture solide de levures Ces manipulations se font en milieu stérile ,
, Délayer 500 mg de levure de boulanger fraiche dans un peu d'eau distillée
, Une fois la levure en suspension, préparer un rateau à l'aide d'une pipette pasteur
, Etaler à l'aide du rateau sur toute la surface Fermer à l'aide de parafilm et conserver à 28°C,70 % d'humidité relative
, Stériliser une ose : la tremper dans l'éthanol puis chauffer à rouge à la flamme
, Prélever une colonie de levures sur le milieu solide YPD préparé en protocole n°5. L'étaler sur un nouveau milieu solide en trait sur une longueur d'environ 1 cm. Recommencer une dizaine de fois par boite. Filmer à l
, Cette manipulation permet d'obtenir des cultures de taille environ similaires, Protocole n°11 : Inoculer des levures en milieu liquide Ces manipulations se font en milieu stérile
, Stériliser une ose : la tremper dans l'éthanol puis chauffer à rouge à la flamme
, A l'aide de l'ose, prélever une colonie de levures. Tremper l'ose dans le milieu liquide et agiter délicatement pour que la colonie se suspende dans le millieu liquide