Mécanismes de transport de glutathion : caractérisation et intervention lors de l'apoptose - Université de Lorraine Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2006

Mechanism of glutathion transport : characterization and intervention during apoptosis

Mécanismes de transport de glutathion : caractérisation et intervention lors de l'apoptose

Résumé

Our thesis work aims to study (1) the in vitro transport of glutathione in the endoplasmic reticulum (pig pancreas and rat liver) and (2) the transport of this tripeptide in MCF-7 and related cells from human mammary adenocarcinoma, when these cells are submitted to proapoptotic treatments. The intervention of the anti-apoptotic Bcl-2 protein in this last process has been evaluated. Rapid uItrafiltration was chosen to measure the transport activities of the microsomal tripeptide. Glutathione was quantified by high performance liquid chromatography. ln the first part of our work, we have observed a preferential uptake of reduced glutathione (GSH) only in RER microsomes, and a slow GSH efflux inhibited by anionic transporters inhibitors. The existence of a GSH transport mechanism involving the translocon in the \ endoplasmic reticulum is proposed. ln the second part of our work, we have shown that the overexpression of Bcl-2 in MCF-7 cells promotes cisplatin and adriamycine resistance by maintaining intracellular GSH level by an inhibition of GSH steady-state efflux. This work provides further insight into the anti-oxidant role ofBcl-2 in cells.
L'objectif de ce travail est d'étudier d'une part le transport in vitro du glutathion au sein du réticulum endoplasmique (pancréas de porc et foie de rat) et d'autre part, le transport de ce tripeptide dans les cellules MCF-7 et apparentées, dérivant d'adénocarcinomes mammaires humains lorsque celles-ci sont soumises à des traitements pro-apoptotiques. L'intervention de la protéine anti-apoptotique Bcl-2 dans ce dernier processus a notamment été évaluée. Une méthode d'ultratiltration rapide a été choisie pour mesurer les activités de transport du tripeptide microsomal. Le glutathion a été quantifié par chromatographie liquide haute performance. Dans la première partie de notre travail, nous avons observé un influx préférentiel du glutathion réduit (OSH) uniquement dans les microsomes de RER, ainsi qu'un efflux de OSH ralenti par des inhibiteurs de transporteurs anioniques. L'existence d'un mécanisme de transport du OSH pouvant faire intervenir le translocon au sein du réticulum endoplasmique est proposé. Dans la deuxième partie de notre travail, nous avons montré que la sur-expression de Bcl-2 dans les cellules MCF -7 favorise la résistance aux anti-cancéreux cisplatine et adriamycine en maintenant le niveau de GSH intracellulaire par une inhibition de l'efflux précoce de GSH. Ceci a permis de préciser le rôle anti-oxydant de Bcl-2 au sein de la cellule.
Fichier non déposé

Dates et versions

tel-01747001 , version 1 (29-03-2018)

Identifiants

  • HAL Id : tel-01747001 , version 1

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Citer

Sandra Osbild. Mécanismes de transport de glutathion : caractérisation et intervention lors de l'apoptose. Biochimie [q-bio.BM]. Université Henri Poincaré - Nancy 1, 2006. Français. ⟨NNT : 2006NAN10246⟩. ⟨tel-01747001⟩
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