Réponse au stress acide chez Streptococcus thermophilus : purification, identification et caractérisation d'une protéine surexprimée - Université de Lorraine Accéder directement au contenu
Thèse Année : 1997

Réponse au stress acide chez Streptococcus thermophilus : purification, identification et caractérisation d'une protéine surexprimée

Humberto Gonzalez Marquez
  • Fonction : Auteur
  • PersonId : 787418
  • IdRef : 145294501

Résumé

Non disponible / Not available
Streptococcus thermophilus a suivi différentes pressions de sélection (stress) lors des protocoles de fabrication ; par exemple, les montées et descentes de la température et l'acidification du milieu. Dans ce travail, nous mettons en évidence, dans un premier temps, que streptococcus thermophilus pb18 surexprime une protéine de masse moléculaire apparente de 16 kda quand elle arrive en phase stationnaire de croissance en milieu m17 (lactose 20g/l, ph). Nous avons également observé que cette protéine est surexprimée quand la croissance est arrêtée brusquement par addition d'acide lactique exogène, afin d'obtenir un ph inferieur à 5,0. Des études d'électrophorèse bidimensionnelle ont montré que cette protéine correspond à une famille de 4 spots protéiques dont le point isoélectrique est compris entre 5 et 5,5 unités de ph. Dans un second temps, les extrémités n-terminales des deux spots principaux obtenus en électrophorèse bidimensionnelle ont été séquencées. Les séquences se sont révélées identiques entre elles. La comparaison de la séquence avec les banques de données a permis de montrer l'identité avec la séquence d'une protéine hypothétique de la souche japonaise de s. Thermophilus no. 29 codée par le plasmide de 3,5 kb, pst1. Enfin, nous avons mis au point un protocole de purification qui nous a permis de l'obtenir avec une haute homogénéité relative. Le protocole présente quatre étapes de purification: 1) précipitation des protéines au sulfate d'ammonium, 2) chromatographie d'échange anionique, 3) chromatographie de phase inverse et 4) chromatographie de phase inverse isocratique. La séquence putative de la protéine de 16 kda a été vérifiée par dégradation d'edman et par spectrométrie de masse des fragments d'hydrolyse enzymatique. Une étude comparative des séquences a montré que la protéine de 16 kda serait homologue à des protéines de choc thermique de classe i chez les végétaux, et plus spécifiquement à la famille des hsp20.
Fichier principal
Vignette du fichier
SCD_T_1997_0018_GONZALEZ_MARQUEZ.pdf (33.88 Mo) Télécharger le fichier
Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)
Loading...

Dates et versions

tel-01747549 , version 1 (29-03-2018)

Identifiants

  • HAL Id : tel-01747549 , version 1

Citer

Humberto Gonzalez Marquez. Réponse au stress acide chez Streptococcus thermophilus : purification, identification et caractérisation d'une protéine surexprimée. Biochimie, Biologie Moléculaire. Université Henri Poincaré - Nancy 1, 1997. Français. ⟨NNT : 1997NAN10018⟩. ⟨tel-01747549⟩
57 Consultations
7 Téléchargements

Partager

Gmail Facebook X LinkedIn More