Développement d’une technique de siRNA chez l’amibe Acanthamoeba castellanii
Résumé
Free-living amoeba are organisms capable of changing from a vegetative form, the trophozoite, to a dormant form, the cyst, under stressful environmental conditions. The signalling pathways of this process remain poorly understood. RNA interference is a genetic tool that would allow to modulate the expression of genes in the amoeba model Acanthamoeba castellanii, as it has already been performed in previous studies. Modulation of theses genes expressions would allow the study of their function. The objective of this internship was to adapt a siRNA protocol using cellulose synthase as the target gene, for which it was shown that expression increases during the encystation process. Although the first step, internalization of siRNA in the cell, was observed, cellulose synthase expression was not downregulated. Several critical points related to this genetic tool remain to be optimized
Les amibes libres sont des organismes capables de passer d’une forme active, le trophozoïte, à une forme de dormance, le kyste, afin de résister à des conditions environnementales qui leurs seraient défavorables. Les voies de signalisation de ce processus restent peu connues. Un outil génétique, l’interférence à l’ARN, permettrait de moduler l’expression de gènes chez l’amibe modèle Acanthamoeba castellanii, comme cela a déjà été réalisé précédemment dans différentes études. La modulation de l’expression de ces gènes permettrait l’étude de leur fonction. L’objectif de ce stage était d’adapter un protocole de siRNA en utilisant comme gène cible, la cellulose synthase, pour lequel il a été montré que l’expression augmente pendant le processus d’enkystement. Bien que la première étape, l’internalisation de siRNA dans la cellule, a été constatée, l’expression de la cellulose synthase n’a pas pu être diminuée. Différents points critiques liés à cet outil génétique restent à optimiser.
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