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Études des aspects structuraux et dynamiques liés à l'activité des particules ribonucléoprotéiques sRNP à boîtes H/ACA catalysant chez les archées l'isomérisation de résidus uridines en pseudouridines

Résumé : La pseudouridylation, l'isomérisation du résidu urine (U) en pseudouridine ([PSI]) est la modification post-transcriptionnelle la plus fréquemment retrouvée dans les ARN. Elle est catalysée par une enzyme ARN:PSI-synthase. Chez les archées et les eucaryotes, cette activité est également portée par des particules ribonucléoprotéiques à boîtes H/ACA (RNP H/ACA). Chez les archées, le complexe comprend quatre protéines invariables dont l'ARN:PSI-synthase aCBF5 et trois protéines partenaires L7Ae, aNOP10 et aGAR1, ainsi qu'un ARN guide qui cible par appariement de bases la position de l'uridine à modifier de l'ARN substrat. Le rôle des partenaires a pu être identifié par des analyses structure-fonction basées sur des approches biochimiques, biophysiques et radiocristallographiques. Au cours de ce travail, nous avons démontré l'existence de disparités fonctionnelles entre les ARN guides d'un même organisme, et l'importance de l'interaction entre L7Ae et aNOP10 pour le positionnement correct de l'ARN substrat. Nous avons testé in vitro l'assemblage et l'activité de particules reconstituées en présence d'ARN guides non conventionnels. L'étude sur la dynamique de l'ARN substrat lors de la pseudouridylation a également été abordée et a permis de déterminer que aGAR1 n'était pas nécessaire pour le mécanisme de turnover de la particule, que la température jouait un rôle crucial pour cette activité, et que la nature du nucléotide cible ainsi que la longueur de l'ARN substrat étaient des éléments importants pour la sélection de cet ARN. Nous avons également mis au point une nouvelle technique basée sur le phénomène de FRET permettant de suivre l'association de l'ARN substrat à la RNP H/ACA
Document type :
Theses
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https://hal.univ-lorraine.fr/tel-01750220
Contributor : Thèses Ul <>
Submitted on : Thursday, March 29, 2018 - 12:40:54 PM
Last modification on : Wednesday, August 29, 2018 - 10:09:08 AM

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DDOC_T_2013_0150_TILLAULT.pdf
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  • HAL Id : tel-01750220, version 1

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Anne-Sophie Tillault. Études des aspects structuraux et dynamiques liés à l'activité des particules ribonucléoprotéiques sRNP à boîtes H/ACA catalysant chez les archées l'isomérisation de résidus uridines en pseudouridines. Biochimie, Biologie Moléculaire. Université de Lorraine, 2013. Français. ⟨NNT : 2013LORR0150⟩. ⟨tel-01750220⟩

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