Étude et maîtrise d'éléments clés du procédé de production de l'[alpha]1,3/4 fucosyltransférase humaine par le système baculovirus / cellules d'insectes - Université de Lorraine Access content directly
Theses Year : 2002

Study and control of key parameters of the production process of human alpha1,3/4 fucosyltranferase using the baculovirus expression vector system

Étude et maîtrise d'éléments clés du procédé de production de l'[alpha]1,3/4 fucosyltransférase humaine par le système baculovirus / cellules d'insectes

Véronique Deparis
  • Function : Author
  • PersonId : 788775
  • IdRef : 069285896

Abstract

Non disponible / Not available
L'objectif général de ce travail est l'étude de la production d'une protéine humaine, l'[alpha]1,3/4 fucosyltransférase Fuc-TIII à l'aide du système d'expression transitoire baculovirus/cellules d'insectes lors de cultures discontinues de cellules Sf9 en flacons agités ou en bioréacteur. Le décès cellulaire est fortement ralenti lors de la culture des cellules en bioréacteur par rapport au flacon agité. La suppression du sérum de veau foetal dans le milieu de culture modifie peu la croissance et le métabolisme des cellules Sf9. En revanche, le remplacement de l'hydrolysat de lactalbumine, supplément courant des milieux pour cellules d'insectes, par un hydrolysat protéique de colza accroît significativement la densité cellulaire en milieu sans sérum. L'infection des cellules par le baculovirus recombinant à une densité cellulaire (DCI) de 30.105 cell/mL avec une multiplicité d'infection (MOI) comprise entre 0,01 et 5 pfu/cell aboutit à une concentration élevée de Fuc-TIII dans le surnageant de culture. La quantité de protéine produite est en effet proportionnelle à la densité cellulaire maximale. L'instabilité importante du titre du stock viral stocké à 4 ?C, en particulier en milieu sans sérum, impose son utilisation rapide après la titration. La mise au point d'une méthode de contrôle de l'infection des cellules par cytométrie en flux a permis de mieux évaluer l'effet de la MOI et de la DCI sur la progression de l'infection dans les cultures. Le profil électrophorétique par western-blot de la Fuc-TIII varie au cours de la période de production, passant d'une seule bande à un doublet, puis à une bande unique de plus petite taille. Cette évolution semble liée à une hétérogénéité de la glycosylation due à une dégradation des fonctions cellulaires lors de l'infection ou à l'action de glycosidases libérées par les cellules lysées. L'étude de la stabilité de la Fuc-TIII a montré que la MOI utilisée pour la production peut modifier le temps de demi-vie de la protéine.
No file

Dates and versions

tel-01750242 , version 1 (29-03-2018)

Identifiers

  • HAL Id : tel-01750242 , version 1

Intranet access

Cite

Véronique Deparis. Étude et maîtrise d'éléments clés du procédé de production de l'[alpha]1,3/4 fucosyltransférase humaine par le système baculovirus / cellules d'insectes. Alimentation et Nutrition. Institut National Polytechnique de Lorraine, 2002. Français. ⟨NNT : 2002INPL022N⟩. ⟨tel-01750242⟩
35 View
0 Download

Share

Gmail Facebook X LinkedIn More