Automation and validation of a test of the red blood cells fragility by slow haemolysis
Automatisation et validation d'un test de fragilité des hématies par hémolyse lente
Résumé
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Le comportement de la membrane de l'hématie et en particulier la mesure de sa résistance osmotique présente un intérêt diagnostique pour le clinicien. De nombreuses pathologies hémolytiques influencent considérablement cette résistance (maladies hémolytiques auto-immunes, sphérocytose héréditaire, ...). Quelques appareils commercialisés permettent d'étudier les propriétés rhéologiques de la membrane et leurs caractéristiques dimensionnelles, mais aucun ne réalise automatiquement la mesure de la résistance des membranes jusqu'à leur rupture. Actuellement seule la technique manuelle proposée par DACIE est utilisée en routine par les laboratoires d'analyses médicales. Dans ce travail, il est développé un appareil (Fragilimètre) destiné à la mesure de la résistance des membranes à l'hémolyse provoquée. Le principe consiste à faire évoluer progressivement la force ionique, de 0,154 M à environ 0,025 M d'une suspension d'hématies diluées dans une solution tampon. La variation de pression osmotique engendrée au niveau de la cellule provoque l'ouverture de pores par lesquels s'échappe l'hémoglobine. La mesure en temps réel de l'intensité de transmission lumineuse traversant une solution de sang total diluée renseigne sur le phénomène. Les résultats obtenus informent directement sur la résistance de la membrane qui est considérée optiquement comme une particule diffusante. La détermination de l'hémolyse initiale, à 50% et totale permet d'apprécier les caractéristiques de l'hémolyse. Les études ont porté principalement sur l'analyse d'échantillons de sang divers (témoins, pathologiques, ...) frais et incubé 24 H à 37?C. Les résultats des valeurs obtenues sur ces différentes populations permettent au système de les distinguer aisément. L'expérience, entièrement automatisée, est réalisée en 10 min.