La découverte de nouveaux médicaments par le criblage biomoléculaire est au centre de la recherche pharmaceutique actuelle. La spectrométrie de masse, en tant que technique d?analyse fiable, reproductible, sensible, spécifique, compatible avec de nombreux types d?échantillons et permettant un débit d?analyse conséquent, trouve ainsi sa place dans les stratégies de recherche et développement de nouveaux médicaments. Le but de ce travail était de mettre en place et de valider une stratégie originale, impliquant la désorption/ionisation laser assistée par matrice couplée à la spectrométrie de masse (MALDI-MS) comme technique de détection, en vue du criblage de la liaison de composés à des cibles moléculaires applicable directement à des extraits de plantes. Le protocole que nous avons développé s?articule en trois étapes successives qui sont l?incubation des molécules à tester avec la cible moléculaire choisie (la tubuline ou la DHFR), l?élimination des composés non liés et enfin l?analyse par MALDI-TOFMS des composés liés. Notre démarche a fait l?objet d?une démarche de validation et les résultats pouvant être obtenus ont été discutés. Le débit pouvant être évalué à 60 échantillons en 1h50 à 3h30 soit de 18 à 32 échantillons à l?heure. Enfin, une démarche innovante nous a permis de prouver que notre approche pouvait être utile également en criblage secondaire. L?application de notre approche à des extraits bruts de plantes (Colchique d?Automne, Pervenche de Madagascar et Thé vert) à permis de mettre en évidence 20 molécules actives se liant à l?une ou l?autre des cibles moléculaires utilisées et d?évaluer l?affinité relative de l?une d?entre elles