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Thèse Année : 1998

Élaboration de sondes fluorescentes pour des applications d'intérêt biologique, et imagerie par microscopie optique en champ proch

Résumé

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Avec l'objectif de développer de nouveaux rotors moléculaires fluorescents, ayant un domaine d'absorption proche de 490 nm, nous avons synthétisé six dérivés de la 7-n,n-diéthylaminocoumarine substitués en position-3 par diverses fonctions (acides, esters et amides). L’intérêt de ces nouveaux traceurs est de répondre à au moins deux critères : permettre des études dans des milieux biologiques en utilisant une lumière excitatrice au-delà des domaines d'absorption des composants cellulaires et développer des observations en microscopie optique en champ proche (source laser à 488 nm). L’étude photophysique des nouveaux fluorophores (fluorescence stationnaire et dynamique) met en évidence une modification des caractéristiques d'émission de fluorescence en fonction des paramètres d'environnement : (i) l'augmentation de la polarité entraine un déplacement bathochrome et (ii) l'augmentation de la viscosité conduit à un rendement quantique de fluorescence plus élevé. Nous décrivons ensuite les trois applications principales qui ont été développées : l'incorporation de ces traceurs dans les liposomes de DPPC (modèles de systèmes biologiques), permet de détecter la température de transition de phase des phospholipides ; à partir de cellules vivantes intactes (cellules endothéliales), nous avons montré grâce à une technique récente de microscopie 3D (CELLScan) que l'un des traceurs fluorescents se révèle être un marqueur spécifique du réticulum endoplasmique (même comportement que le dérivé cyanine DiOC6) ; pour la première fois dans notre laboratoire, l'observation par microscopie optique en champ proche (SNOM) d'échantillons biologiques a permis de mettre en avant les potentialités de cette technique pour la réalisation d'images topographiques et optiques avec une résolution latérale pouvant atteindre 50 nm. De plus, nous avons obtenu les premières images en émission de fluorescence pour des cellules biologiques marquées avec un dérivé coumarine.
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Dates et versions

tel-02003050 , version 1 (07-02-2019)

Identifiants

  • HAL Id : tel-02003050 , version 1

Citer

Christelle Geoffroy-Chapotot. Élaboration de sondes fluorescentes pour des applications d'intérêt biologique, et imagerie par microscopie optique en champ proch. Physique [physics]. INPL - Institut National Polytechnique de Lorraine, 1998. Français. ⟨NNT : 1998INPL079N⟩. ⟨tel-02003050⟩
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