Mise au point d’un système de purification de la molécule signal impliquée dans la communication entre les bactéries Streptomyces ambofaciens et Pseudomonas fluorescens
Résumé
Streptomyces ambofaciens ATCC23877 is a soil bacterium known to produce many secondary metabolites, some of which are of industrial interest. Interaction studies between S. ambofaciens and other soil bacteria have revealed an interaction with Pseudomonas fluorescens BBc6R8. P. fluorescens is able to influence the control of antibiotic synthesis in S. ambofaciens. In the presence of P. fluorescens, S. ambofaciens no longer produces kinamycin, an antibiotic synthesized by the alp cluster. The kinamycin biosynthesis genes are regulated in this cluster by a protein called AlpZ. This protein is capable of binding to specific sequences of DNA in the promoter regions of certain genes and to suppress their expression. However, a signal molecule close to the family of ?- butyrolactones can, when it is present in high enough quantities, bind to AlpZ and prevent its repressive effect. The unknown signal molecule, ligand of Alpz, is a candidate as a target of P. fluorescens. Thus, this work aims to make possible the purification of this unknown molecule for its characterization. Separately, a reporter system which allows to easily detect the presence of this molecule is constructed. It would thus lead to learning more about the interaction between these two bacteria, and about the model for regulating the synthesis of kinamycine.
Streptomyces ambofaciens ATCC23877 est une bactérie du sol connue pour produire de nombreux métabolites secondaires dont certains sont d’intérêt industriel. Des études d’interaction entre S. ambofaciens et d’autres bactéries du sol ont révélé une interaction avec Pseudomonas fluorescens BBc6R8. P. fluorescens est en effet capable d’agir sur la régulation de la synthèse d’antibiotique chez S. ambofaciens. En présence de P. fluorescens, S. ambofaciens ne produira plus de kinamycine, un antibiotique synthétisé par le cluster alp. Les gènes de biosynthèse de la kinamycine sont régulés dans ce cluster par une protéine nommée AlpZ. Cette protéine est capable de se fixer sur des séquences d’ADN spécifique dans les régions promotrices de certains gènes et de réprimer leur expression. Cependant, une molécule signal proche de la famille des ?-butyrolactones peut, quand elle est présente en quantités assez élevées, se fixer à AlpZ et empêcher son effet répresseur. Cette molécule signal inconnue, ligand d’AlpZ est un candidat en tant que cible de P. fluorescens. Ainsi, ce travail a pour objectif de rendre possible la purification de cette molécule signal inconnue en vue de sa caractérisation. Tout en construisant en parallèle un système rapporteur qui permet de détecter facilement la présence de cette molécule. Cela permettrait donc d’en apprendre d’avantage quant à l’interaction entre ces deux bactéries, et sur la modèle de régulation de la synthèse de la kinamycine.