Evaluation de l'impact de différents stress chroniques sur la diversité du microbiote intestinal murin
Résumé
Intestinal microbiota is a complex ecosystem that, through constant host-microbial cross-talk, has many essential functions for our heath. Recent data suggest that host's stress could impact composition and diversity of intestinal microbiota. Involvement of intestinal dybiosis has been correlated with numerous diseases. This imbalanced microbiota was also associated with weak immune system and increased risks of infections. The aim of this study is to assess the impact of different stresses on intestinal microbial diversity with murine model through two molecular approaches. The first one is pyrosequencing 16S rRNA gene to assess the composition of microbiota. At the same time, we used real-time quantitative PCR to quantify bacterial abundance and relative abundance main gut's phyla. (Bacteroidetes and Firmicutes). These methods were applied to intra-caecal samples (n=90) from mice that were chronically stressed during 21 days as well as from control group.We compared the effect on microbiota of a psychologic chronic ultra-mild stress (CUMS) and of two hypergravity stress (mechanic stress alone or associated to psychocological stress). Characterization of microbial groups that are impacted by chronic stress could lead to a better understanding of some species roles in microbiota equilibrium. At mid-term, these results would allow to test pharmacological and nutritional approaches that could limit chronic stress-associated dysbiosis in order to avoid development or worsening of pathologies.
Le microbiote intestinal est un écosystème complexe qui, par le biais d'interactions constantes avec l'hôte, exerce de nombreuses fonctions indispensables à notre santé. Des données récentes suggèrent qu'un stress de l'hôte pourrait impacter la composition et la diversité du microbiote intestinal. Or l'implication possible d'une dysbiose dans des pathologies diverses a été avancée et parfois démontrée. Ce déséquilibre du microbiote est également associé à une baisse des défenses immunitaires et un risque infectieux accru. L'objectif de cette étude est d'évaluer l'impact de différents types de stress chroniques sur la diversité du microbiote intestinal murin par deux approches moléculaires. Une approche de pyroséquençage du gène codant l'ARNr 16S est utilisée pour évaluer la composition globale du microbiote intestinal et caractériser les variations liées au stress. L'application en parallèle d'une approche de PCR en temps réel permet de quantifier la charge bactérienne ainsi que l'abondance relative des deux principaux phylums intestinaux (Bacteroidetes et Firmicutes). Ces techniques ont été appliquées à des échantillons intra-caecaux (n=90) prélevés chez des souris ayant subit un stress chronique de 21 jours, ainsi que chez des souris témoins. Nous avons comparé les effets sur le microbiote d'un stress psychologique pur d'intensité modéré (appelé CUMS pour Chronic Ultra-Mild Stress) et de deux stress liés à une hypergravité (stress mécanique seul ou associé à un stress psychologique). La caractérisation des groupes bactériens impactés par un stress chronique de l'hôte mènera à une meilleure compréhension du rôle joué par certaines espèces dans l'équilibre du microbiote. A moyen terme, ces données permettront de tester l'effet de divers moyens pharmacologiques ou nutritionnels permettant de limiter la dysbiose liée au stress chronique afin d'éviter le développement ou l'aggravation de certaines pathologies.