Le transfert horizontal d’éléments génétiques joue un rôle clé dans l’évolution des génomes bactériens. Parmi ces éléments, certains sont capables de se transférer par conjugaison, c’est le cas des éléments intégratifs conjugatifs (ICE). La relaxase, qui est une protéine essentielle pour ces éléments conjugatifs, est une endonucléase simple brin qui initie le transfert de l’élément. L’objectif de ce stage est la caractérisation du site actif de la relaxase d’ICESt3, un ICE retrouvé chez Streptococcus thermophilus, et membre d’une famille particulièrement représentée au sein des firmicutes. Cette relaxase présente la particularité d’appartenir à une nouvelle famille de relaxases (famille MOBT) qui n’a à ce jour jamais été étudiée biochimiquement. Le site actif de cette relaxase a été muté au niveau de différents résidus susceptibles d’être impliqués dans l’activité de la protéine, ou indirectement dans la coordination d’un cofacteur métallique souvent utilisé par ce type d’enzyme. Après avoir standardisé un test d’activité de la relaxase, des protéines mutantes ont été produites et testées. Les résultats ont permis de déterminer les acides aminés impliqués dans l’activité de la relaxase ainsi que ceux permettant la coordination du cation.