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Master thesis

Mise en évidence du caractère infectieux des adénovirus par culture cellulaire couplée à une hybridation in situ

Résumé : Les adénovirus humains, membres de la famille des Adenoviridae, font partie des virus les plus couramment identifiés dans les eaux de surface contaminées et ont été inclus dans la liste des 12 contaminants microbiens à surveiller dans les eaux de consommation (CCL 3, US EPA). L'objectif de ce travail était de développer une méthode rapide de visualisation du caractère infectieux par hybridation in situ de l'ARN messager viral avec une sonde oligonucléotidique fluorescente de type «molecular beacon». Suite à la réplication virale dans les cellules hôtes, les sondes forment des hybrides avec les ARN messager viraux. Cela induit un changement conformationnel spontané des sondes, qui dès lors fluorescent. Le signal peut ensuite être détecté en microscopie confocale à balayage laser. Le protocole expérimental (fixation et perméabilisation des cellules, marquages des composants cellulaires, condition d'hybridation...) a été élaboré à l'aide de l'adénovirus type 2 et de la lignée cellulaire HEK 293A. Malgré des problèmes de reproductibilité et la nécessité d'approfondir l'optimisation de cette technique, les résultats obtenus se sont révélés prometteurs car ils ont permis de détecter l'ARNm viral à l'intérieur des cellules en moins de 24 h après l'infection.
Document type :
Master thesis
File URL :
http://docnum.univ-lorraine.fr/public/BUS_M_2013_BRAGARD_TAMARA.pdf
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https://hal.univ-lorraine.fr/hal-01864511
Contributor : Memoires Ul <>
Submitted on : Thursday, August 30, 2018 - 9:45:00 AM
Last modification on : Thursday, August 30, 2018 - 10:00:56 AM

File

BUS_M_2013_BRAGARD_TAMARA.pdf
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  • HAL Id : hal-01864511, version 1

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Tamara Bragard. Mise en évidence du caractère infectieux des adénovirus par culture cellulaire couplée à une hybridation in situ. Microbiologie et Parasitologie. 2013. ⟨hal-01864511⟩

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