Quantification d’adénovirus infectieux par la détection de marqueurs viraux dans les cellules infectées
Résumé
Adenoviruses are one of the most common enteric viruses responsible for waterborne viral infections. The cell culture assay remains the reference method for detection of infectious viral particles, but it is often slow as it requires at least 10 days of incubation. However, this approach can be associated with viral genome (ICC-qPCR) or viral proteins (immunolabeling in situ) detection methods. Here both methods were assessed for rapid detection and quantification of adenovirus serotype 2 infection. The ICC-qPCR analysis performed at 24 h post-infection allowed the quantification of infectious adenovirus concentrations ranging between 10 and 106 MPNUC/ml (Most Probable Number of Cytopathic Units/mL). At the same time point the immunolabeling in situ led to the detection of infected fluorescent cells at a concentration of 105 MPNUC/ml. We also observed that in the case of evaluation of partial adenovirus inactivation following heat exposure of viral particles (45-55°C), the immunolabeling in situ was the only method remaining consistent with cell culture assay.
Les adénovirus sont des virus entériques très fréquents dans le milieu hydrique. La culture cellulaire constitue la méthode de référence de détection des particules infectieuses, mais elle nécessite au minimum 10 jours d’incubation pour ces virus. Par contre, elle peut être associée à des méthodes de détection plus rapides du génome viral (ICC-qPCR) ou des protéines virales (immunomarquage in situ) dans les cellules infectées. La capacité de ces deux méthodes à quantifier les adénovirus infectieux a été évaluée avec une souche d’adénovirus de sérotype 2. L’ICC-qPCR, avec une analyse réalisée 24 h post-infection, permet la quantification des adénovirus infectieux pour des concentrations comprises entre 10 et 105 NPPUC/mL. L’immunomarquage in situ avec dénombrement des cellules infectées fluorescentes 24 h après infection est applicable pour une concentration de 105 NPPUC/mL (Nombre le Plus Probable d’Unités Cytopathiques/mL). Lors de l’exposition des adénovirus à la chaleur (45 à 55°C), seul l’immunomarquage in situ est en accord avec la culture cellulaire en cas d’inactivation partielle des virus.