Chromatographie de faible affinité pour la découverte de médicament : nouvelle méthodologie de criblage ultra miniaturisée pour les protéines membranaires - Université de Lorraine Access content directly
Master Thesis Year : 2021

Low affinity chromatography for drug discovery : new ultra miniaturized screening methodology for membrane proteins

Chromatographie de faible affinité pour la découverte de médicament : nouvelle méthodologie de criblage ultra miniaturisée pour les protéines membranaires

Aurélien Renaudin
  • Function : Author
  • PersonId : 1240443
  • IdRef : 267199996

Abstract

L’industrie Pharmaceutique est toujours à la recherche de nouveaux principes actifs. La première étape consiste à identifier une cible thérapeutique. Une fois cette cible identifiée il faut découvrir une molécule qui présente l’activité recherchée sur la cible thérapeutique. Cette molécule est identifiée lors d’une étape de criblage. La méthode de référence est le high throughput screening est a été majoritairement utilisée pour découvrir des principes actifs ces dernières années, mais comme toute techniques elle présente ses avantages et ses limites. Pour pallier ces limites de nouvelles approches sont développée. Une nouvelle approche pour trouver des molécules actives est le Fragment based drug design qui repose sur l’identification de petit fragment ayant une faible affinité pour la cible. Plusieurs techniques capables de détecter la faible affinité sont utilisées pour cribler des bibliothèques de fragments. Cependant ces méthodes présentent des limitations comme une grande consommation de protéine et de nouvelles techniques complémentaires sont nécessaires. La chromatographie de faible affinité ou weak affinity chromatography est une nouvelle approche qui a déjà été développée pour le FBDD. La miniaturisation de cette technique (nano-WAC) permettrait de réduire la consommation de protéines. L’objectif expérimental de ce travail est de préparer des colonnes d’affinité miniaturisées, d’y greffer des protéines (les cibles thérapeutiques), d’évaluer leurs performances et d’identifier de potentiels fragments pour une protéine membranaire modèle : A2A. Des colonnes HSA et nanodisques A2A ont été préparées et le nombre de protéines greffées est suivi en UV. Une augmentation du nombre de nanodisques greffés a été réalisée par ajout de cycle de greffage. Une évaluation des capacités de reconnaissance de la colonne avec des fragments modèles (le furosémide et la warfarine) puis une comparaison de trois méthodes pour déterminer le Kd des modèles a été effectuée et montre des valeurs cohérentes entre elles et avec la littérature. Enfin l’étude de fragments potentiels pour l’A2A a été effectuée sur les colonnes nanodisques A2A. 4 fragments confirmés comme ayant de l’affinité en RMN ont bien montré une affinité avec cette méthode. La nano-WAC permet donc d’étudier des potentiels fragments pour une protéine membranaire et est applicable pour toutes protéines membranaires incorporées à des nanodisques.
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Origin : Files produced by the author(s)

Dates and versions

hal-04042728 , version 1 (23-03-2023)

Identifiers

  • HAL Id : hal-04042728 , version 1

Cite

Aurélien Renaudin. Chromatographie de faible affinité pour la découverte de médicament : nouvelle méthodologie de criblage ultra miniaturisée pour les protéines membranaires. Sciences pharmaceutiques. 2021. ⟨hal-04042728⟩
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