Création d’un contexte mutateur chez Streptomyces ambofaciens ATCC23877 - Université de Lorraine Access content directly
Master Thesis Year : 2022

Création d’un contexte mutateur chez Streptomyces ambofaciens ATCC23877

Abstract

DNA double-strand breaks are the source of chromosomal rearrangements, frequently observed in bacteria of the Streptomyces genus. In these bacteria, NucS, a protein involved in mismatch repair, proceeds by generating a double-strand break at its site of action. Are NucS-dependent double-strand breaks at the origin of the particular chromosomal instability of this bacterium? To answer this question, we have undertaken to increase the frequency of mismatches by affecting replication fidelity and more precisely by inactivating the proofreading function of the replicative polymerase carried by DnaE. To do so, the innovative CRISPR-BEST system, derived from the CRISPR-Cas9 system, was used to introduce a mutation in the triplet coding for the amino acid at position H44 of DnaE. This mutation results in a mutator context that is currently being characterised. In parallel, the construction of merodiploid contexts, likely to present a less marked mutator phenotype, is under progress.
Les cassures double-brin de l’ADN sont la source de remaniements chromosomiques observés fréquemment chez les Streptomyces. Chez ces bactéries, NucS, protéine impliquée dans la réparation des mésappariements, procède en générant une cassure double-brin sur son site d’action. Les cassures double-brin NucS dépendantes sont-elles à l’origine de l’instabilité chromosomique particulière de Streptomyces ? Pour répondre à cette question, il a été entrepris d’augmenter la fréquence des mésappariements en affectant la fidélité de réplication, et plus précisément en inactivant la fonction proofreading de la polymérase réplicative portée par DnaE. Pour ce faire, le système innovant CRISPRBEST, dérivé du système CRISPR-Cas9, a été mis en oeuvre afin d’introduire une mutation du triplet codant l’acide aminé en position H44 de DnaE. Cette mutation a permis l’obtention d’un contexte mutateur en cours de caractérisation. En parallèle, la construction de contextes mérodiploïdes, susceptibles de présenter un phénotype mutateur moins marqué est également entreprise.
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Dates and versions

hal-04588465 , version 1 (27-05-2024)

Identifiers

  • HAL Id : hal-04588465 , version 1

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Cite

Elise Richet. Création d’un contexte mutateur chez Streptomyces ambofaciens ATCC23877. Microbiologie et Parasitologie. 2022. ⟨hal-04588465⟩
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