Microparticle-enhanced nephelometry : the proteolytic system of plasminogen in human blood and bovine milk
Immunonéphélémétrie microparticulaire : système protéolytique du plasminogène dans le sang humain et le lait bovin
Résumé
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Le but de ce travail est de développer une méthode de dosage du plasminogène qui puisse s'appliquer dans divers milieux biologiques. L'immunonéphélémétrie microparticulaire permet de doser l'enzyme dans le sang humain et le lait bovin, deux milieux ou les conséquences de la protéolyse qu'elle implique sont très différents. Le système utilisé pour la mise au point du dosage du plasminogène humain présente une sensibilité de 50 ng/ml. Sa validation fait apparaitre la fidélité et l'exactitude de la méthode. En nous basant sur la forte homologie de séquence entre les plasminogènes humain et bovin, ce dosage est adapté en plusieurs étapes pour évaluer le plasminogène bovin en milieu lait. Le système final présente une sensibilité de 5 ng/ml et permet d'utiliser des échantillons dilués au 1/200. A cette dilution, les caséines du lait interviennent en influençant l'agglutination des réactifs micros particulaires. Il est donc nécessaire de prétraiter les laits. Ce dosage est appliqué à une étude du plasminogène et de son substrat principal, la caséine beta, sur des laits de troupeau. Les résultats montrent que les deux paramètres présentent des variations saisonnières et qu'ils évoluent indépendamment sur la période d'expérimentation de 4 mois. Les teneurs des laits en plasminogène s'échelonnent de 1,05 à 3,35 mg/l. L'élargissement de l'étude à 13 mois, associé à un système utilisant des anticorps monoclonaux différenciant le plasminogène de la plasmine, devrait permettre, dans des études à venir, d'affiner ces résultats.
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