La qualité microbiologique de l'eau potable peut fortement se dégrader au cours de son transport dans les réseaux de distribution en raison notamment du détachement de bactéries présentes au sein de biofilms qui se développent inévitablement à la surface interne des canalisations. Cette étude développe une approche originale consistant à évaluer in situ et en temps réel la stabilité microbiologique d'une eau via l'empreinte spectrale infrarouge (IR) en mode réflexion totale atténuée (ATR) d'un jeune biofilm de référence constitué d'une monocouche de bactéries. Pseudomonas fluorescens a été choisie comme bactérie modèle. Ses signatures spectrales, infrarouge et Raman, ont été étudiées dans un premier temps à l'état planctonique et ce en fonction de la phase de croissance et de l'état d'hydratation. Le suivi in situ, via une cellule IR-ATR à circulation, des premières étapes de l'adhésion bactérienne, a ensuite permis de déterminer les conditions opératoires optimales de formation sur le cristal ATR du biofilm de référence. La structure de ce dernier a été caractérisée par microspectrométrie Raman et microscopie à épifluorescence. Enfin, la réponse du biofilm de référence exposé à des eaux contenant différentes quantités de carbone organique dissous (COD), facteur clé de la biostabilité d'une eau, a été analysée. Cette dernière partie montre très clairement la dynamique de croissance du biofilm et la corrélation entre les changements observés dans le profil spectral du biofilm naissant et les variations de la quantité de COD, et illustre le potentiel que pourrait présenter la méthode proposée en matière de gestion de la qualité microbiologique des eaux de distribution.