Rôle de la structure quaternaire de la Glycéraldéhyde 3-phosphate Déshydrogénase (GAPDH) phosphorylante de Bacillus stearothermophilus dans la révélation de l'activité enzymatique et les propriétés de coopérativité de fixation du cofacteur - Université de Lorraine Access content directly
Theses Year : 1999

Rôle de la structure quaternaire de la Glycéraldéhyde 3-phosphate Déshydrogénase (GAPDH) phosphorylante de Bacillus stearothermophilus dans la révélation de l'activité enzymatique et les propriétés de coopérativité de fixation du cofacteur

Olivier Roitel
  • Function : Author
  • PersonId : 759048
  • IdRef : 145174131

Abstract

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Notre étude a consisté à étudier les propriétés des gapdh dimeriques générées par ingénierie protéique, à les relier à leur état oligometrique et à les comparer à celles de l'enzyme tetramerique de type sauvage. A partir des structures cristallographiques des formes Apo- et holoenzyme de la gapdh de b. Stearothermophilus connues à haute résolution et grâce à l'outil modélisation moléculaire, des mutations appropriées ont été introduites aux interfaces r et q de la gapdh tetramerique de type sauvage et ont permis de générer des gapdh mutées produites sous forme strictement dimerique ou sous deux formes dimère et tétramère en équilibre. Notre étude a montré que les dimères générés sont très probablement de type o-p, en raison du plus grand nombre de contacts interatomiques s'établissant le long de l'interface p, du plus petit nombre de résidus hydrophobes exposés au solvant et de leur meilleure affinité pour le nadp comparée à celle pour le nad. Les gapdh dimeriques générées sont inactives tandis que les formes tetrameriques générées possèdent une activité enzymatique variable suivant les cas. Cette absence d'activité peut-être attribuée à une modification de la conformation du site actif, comparée à celle dans le tétramère. La fixation du nad par la gapdh de type sauvage et les gapdh tetrameriques mutées peut être décrite par un modèle à au moins 2 constantes de dissociation, indiquant que ces enzymes sont en fait constituées de 2 dimères indépendants. Cela n'est pas en contradiction avec la structure cristallographique de la gapdh de b. Stearothermophilus qui peut être décrite comme un dimère de dimères. Les gapdh dimeriques testées conservent des propriétés de coopérativité de fixation du cofacteur, ce qui indique que l'interface p est essentielle pour transmettre l'information structurale. L'étude de l'équilibre existant entre les formes dimerique et tetramerique du mutant (n180g-e276g) a montré une apparente non totale réversibilité de l'équilibre.
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tel-01748643 , version 1 (29-03-2018)

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  • HAL Id : tel-01748643 , version 1

Cite

Olivier Roitel. Rôle de la structure quaternaire de la Glycéraldéhyde 3-phosphate Déshydrogénase (GAPDH) phosphorylante de Bacillus stearothermophilus dans la révélation de l'activité enzymatique et les propriétés de coopérativité de fixation du cofacteur. Biochimie, Biologie Moléculaire. Université Henri Poincaré - Nancy 1, 1999. Français. ⟨NNT : 1999NAN10291⟩. ⟨tel-01748643⟩
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